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  • 細胞粘附

    細胞粘附

    細胞粘附分子(cell adhesion molecules,CAMs) 是一類膜表面糖蛋白,它們以配體-受體特異性結合的方式介導細胞與細胞間、細胞與細胞外基質間的相互接觸和結合并調節細胞功能,在胚胎發育和分化、正常組織結構的維持、炎癥反應、免疫應答、凝血和血栓形成、創傷修復、腫瘤浸潤與轉移等許多生理和病理過程中發揮重要的生物學作用。  實驗步驟:    1. 用10ug/ml的Fn預鋪96孔板,70ul/孔,4℃過夜后,PBS洗3遍    2. 再用1% BSA于37℃封閉1h,PBS洗3遍    3. 待測細胞培養至對數生長期,消化細胞,用無血清培養基懸浮細胞,用血球計數板計數,調整濃度為5*105/ml    4. 分別接種于預鋪Fn的96孔板中,每孔5000個細胞,每組設3個復孔。37 ℃孵育1 h后,PBS洗去未黏附的細胞    5. 5%戊二醛于4 ℃固定0.5 h,PBS 洗3遍;0.1%的結晶紫染色,室溫靜止0.5 h,PBS洗3 遍    6. 每孔加入100μl 10%的乙酸,5~10 min后用酶標儀檢測595nm的吸光度值,用以表示黏附細胞的多少    7. 或者按照每孔加入100 ul甲醇,固定15min    8. 每孔加入100 ul吉姆薩染液,染色15min,PBS洗去染液    9. 倒置顯微鏡下隨機取5個隨機視野計數粘附細胞數量病拍照,統計結果服務周期:服務內容說明價格∕元實驗周期細胞粘附建議3重復詢價5個工作日 溫馨提醒:若用酶標儀計數為步驟1-6;若需要照片用步驟1-4,7-9 
  • 細胞增殖(MTT)

    細胞增殖(MTT)

    活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲臜(Formazan)并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細胞中的甲臜,用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高。   實驗步驟:  1. 收集對數期細胞  2. 酶消化  3. 血球計數板計  4. 換液  5. 加MTT固定,孵育  6. 加DMSO,振蕩  7. 測OD值  我們提供:     1. 實驗報告,包括實驗材料、方法、步驟和實驗結果     2. 原始數據,包括OD值和折線圖   結果示意圖:    服務周期:  服務內容說明價格∕元實驗周期MTT貼壁細胞詢價3個工作日MTT懸浮細胞詢價3個工作日   溫馨提醒:  1. 需對數期細胞  2. 提供實驗分組,試劑刺激細胞時間和使用濃度 
  • 細胞侵襲

    細胞侵襲

    Matrigel是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質成分,含有LN、IV型膠原、接觸蛋白和肝素硫酸多糖,鋪在無聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯濾膜上,能在DMEM培養基中重建形成膜結構,這種膜結構與天然基質膜結構極為相似。濾膜孔徑一般為8μm,而且膜孔都被Matrigel覆蓋,細胞不能自由穿過,必須分泌水解酶,并通過變形運動才能穿過這種鋪有Martrigel的濾膜,這與體內情況較為相似??赏ㄟ^這種模型來檢測細胞的侵襲情況。通過體外模型來檢測細胞的侵襲情況,主要應用于各種細胞因子對惡性腫瘤細胞侵襲和轉移的影響及一些抑制血管生成的新藥研究。實驗步驟:  1. matrigel在4℃過夜融化  2. 稀釋matrigel至終濃度1mg/ml  3. 在chamber上室底部中央垂直加入稀釋后的matrigel。37℃溫育4-5 h  4. 所有細胞培養試劑和Transwell chamber放在37℃恒溫水浴箱溫育  5. 消化培養至對數期的細胞,用無血清培養基懸浮細胞,計數,調整濃度為5*105/ml  6. 在下室加入含20%血清的培養基。上室加入細胞懸液,37 ℃、5%CO2、飽和濕度條件下繼續培養24 h  7. 取出chamber,吸干上室液體,移到預先加入甲醇的孔中,室溫固定30min  8. 取出chamber,吸干上室固定液,移到預先加入結晶紫染液的孔中,室溫染色15-30min;用PBS沖洗浸泡數次,取chamber,先用干棉簽將上室內液體吸去,再用棉簽輕輕擦Matrigel凝膠和聚碳酯膜上表面的細胞  9. 揭下膜表面上的細胞,晾干,封片  10. 顯微鏡下計數,統計結果;(若不用保存底膜,可省去步驟9)結果示意圖:                服務周期:服務內容說明價格∕元實驗周期細胞侵襲建議3重復1200/板3個工作日 溫馨提醒:1. 提供105細胞2. 一塊板共有24個小室,不足一塊板按照一塊板收費  
  • 細胞遷移

    細胞遷移

    將Transwell小室放入培養板中,小室內稱上室,培養板內稱下室,上室內盛裝上層培養液,下室內盛裝下層培養液,上下層培養液以聚碳酸酯膜相隔。將細胞種在上室內,由于聚碳酸酯膜有通透性,下層培養液中的成分可以影響到上室內的細胞,從而可以研究下層培養液中的成分對細胞遷移運動等的影響。實驗步驟:  1. 37℃溫育細胞培養試劑和Transwell  2. 收集對數期細胞,懸浮細胞,計數  3. 下室加含血清培養液,上室加細胞懸液培養  4. 甲醇固定  5. 結晶紫染色  6. 中性樹脂封片  7. 統計結果結果示意圖:              服務周期:服務內容說明價格∕元實驗周期細胞遷移(Transwell法)建議3重復詢價3個工作日溫馨提醒:   1. 至少提供105細胞   2. 提供細胞相關信息
  • 透射電鏡

    透射電鏡

    利用電子射線(或稱電子束)穿透樣品,而后經多級電子放大后成像于熒光屏。透射率高,可以用來觀察組織和細胞內部的超微結構以及微生物和生物大分子的全貌。能分辨0.1納米以下的微細物質結構,放大倍數可達100萬余倍。實驗步驟:  1. 取材  2. 固定 (2.5%戊二醛)  3. 脫水          4. 包埋         5. 固化                        6. 超薄切片機切片 50-60 nm  7. 3%醋酸鈾-枸櫞酸鉛雙染色  8. 透射電鏡掃描拍照我們提供:  1. 每個標本提供兩張照片  2. 提供實驗方法、步驟、所用試劑、儀器,實驗結果將以電子或書面形式提交給您結果示意圖:                        服務周期:服務內容說明價格∕元實驗周期透射電鏡普通標本詢價30個工作日 溫馨提醒:  1. 確保細胞或組織取材新鮮,固定及時  2. 標本修成**面寬度不超過2cm  3. 提供實驗必要的信息,例如組織來源、實驗目的和拍照要求
  • 掃描電鏡

    掃描電鏡

    在光學顯微鏡下小于0.2mm的一些細微結構,即便是再提高放大倍數也無法看清,這些結構稱為亞顯微結構或超微結構。要想看清這些結構,就必須選擇波長更短的光源,以提高顯微鏡的分辨率。目前掃描電鏡的分辨力為6~10nm,掃描電鏡的**有效放大倍率為0.2mm/10nm=20000X。樣品制備簡單,放大倍數大,分辨率高,場景深,圖像立體感豐富,易于識別和解釋,廣泛應用于生物學和醫學等領域。實驗步驟:        1. 清洗:一般用pH7.2磷酸鹽緩沖        2. 固定:常規法用2.5﹪戊二醛前固定24h(放入0-4℃冰箱中)即可。一些特殊樣品,如幼嫩的、含水量高的樣品**還是用四氧化鋨后固定2h        3. 脫水:乙醇系列30﹪-50﹪-70﹪-85﹪-95﹪-100﹪(2次)逐級脫水,每級10-15min,塊大的應適當搖動,保證脫水干凈        4. 中間液代換:分兩步。第一步用醋酸(異)戊酯:乙醇=1:1的混合液浸泡10min,第二步用醋酸異戊酯浸泡10min,適當搖動        5. 臨界點干燥:代換后的樣品轉入樣品籃中,放進預冷的臨界點干燥儀樣品室內,蓋好室蓋后注入液體二氧化碳,以淹沒樣品為準,先升溫至15℃加熱10min,再升溫至35℃讓其氣化,觀察液體全氣化后慢慢放氣,必須待氣放盡才能開蓋取樣        6. 粘貼樣品:一般樣品可用雙面膠帶粘貼,如果樣品塊大,導電性差,必須用導電膠粘貼        7. 鍍膜后入鏡觀察我們提供:1. 每個樣本提供兩張照片2. 提供具體的實驗方法、步驟、所用試劑、儀器,實驗結果將以電子或書面形式提交給您結果示意圖:  服務周期:服務內容說明價格∕元實驗周期掃描電鏡提供2張照片詢價30個工作日 溫馨提醒:    1. 組織修成**寬度不超過2cm大小    2. 提供組織相關信息,拍照要求,參考文獻
  • 流式細胞周期

    流式細胞周期

    PI ,即碘化丙錠,可以與細胞內DNA 和RNA 結合,采用RNA酶將RNA消化后,通過流式細胞術檢測到的與DNA 結合的PI 的熒光強度直接反映了細胞內DNA含量的多少。由于細胞周期各時相的DNA 含量不同,通常正常細胞的 G0/G1 期具有二倍體細胞的DNA 含量(2N) ,而G2/ M 期具有四倍體細胞的DNA 含量(4N) ,而S 期的DNA含量介于二倍體和四倍體之間。因此,通過流式細胞術PI染色法對細胞內DNA 含量進行檢測時,可以將細胞周期各時相區分為 G0/G1 期,S 期和G2/ M期,并可通過特殊軟件計算各時相的百分率。實驗步驟:   1.  細胞鋪板   2.  細胞同步化處理   3.  樣品收集   4.  上機檢測   5.  同步化數據分析結果示意圖: 服務周期:服務內容說明價格∕元實驗周期流式細胞周期建議3重復詢價5個工作日  溫馨提示:1. 提供108細胞2. 提供細胞處理方案
  • 流式細胞檢測

    流式細胞檢測

    流式細胞檢測技術是利用流式細胞儀,以高能量激光照射高速流動狀態下被熒光色素染色的單細胞或微粒,測量其產生的散射光和發射熒光的強度,從而對細胞的物理、生理、生化、免疫、遺傳、分子生物學性狀及功能狀態等進行定性或定量檢測的一種現代細胞分析技術。  實驗步驟:  1. 用T25培養瓶培養各細胞株,代細胞生長達到80-90%融合后,棄掉舊培養液  2. 用2ml的PBS洗細胞兩次后,加入胰酶消化細胞,顯微鏡下觀察細胞變圓即可,加入4ml的完全培養液終止消化  3. 用移液器輕輕吹下細胞,將細胞混合液移入15ml離心管中,1000r/m離心10min,離心結束后,棄掉培養液上清,用5mlPBS 懸浮細胞沉淀,1000r/m離心10min  4. 棄上清后用500ul PBS懸浮細胞沉淀。之后分別加入抗體,4℃條件下孵育30min用流式細胞儀進行流式分析結果示意圖:   服務周期:服務內容說明價格∕元實驗周期流式檢測不包括試劑盒費用詢價3個工作日 溫馨提醒:1.  流式分選建議用直標抗體2.  提供105細胞 
  • 流式細胞分選

    流式細胞分選

    流式細胞分選技術是利用流式細胞分選儀,以高能量激光照射高速流動狀態下被熒光色素染色的單細胞或微粒,測量其產生的散射光和發射熒光的強度,從而對細胞的物理、生理、生化、免疫、遺傳、分子生物學性狀及功能狀態等進行定性或定量檢測的一種現代細胞分析技術,它可根據發射光的熒光強度和波長將發光顆粒亞群分開并可實現單克隆分選,對復雜樣本中的細胞進行鑒定、分類、定量和分離,分選后的細胞能直接用于培養、移植、核酸提取、單細胞PCR擴增或原位雜交等。   實驗步驟:  1. 用T25培養瓶培養各細胞株,代細胞生長達到80-90%融合后,棄掉舊培養液  2. 用2ml的PBS洗細胞兩次后,加入胰酶消化細胞,顯微鏡下觀察細胞變圓即可,加入4ml的完全培養液終止消化  3. 用移液器輕輕吹下細胞,將細胞混合液移入15ml離心管中,1000r/m離心10min,離心結束后,棄掉培養液上清,用5mlPBS 懸浮細胞沉淀,1000r/m離心10min  4. 棄上清后用500ul PBS懸浮細胞沉淀。之后分別加入抗體,4℃條件下孵育30min用流式分選細胞儀進行流式分析  結果示意圖:  服務周期:服務內容說明價格∕元實驗周期流式分選不包括試劑盒費用詢價3個工作日   溫馨提醒:  1.  流式分選建議用直標抗體  2.  多通道篩選,需選用不同標記的一抗  3.  另外收取1200元開機費
  • 流式凋亡檢測

    流式凋亡檢測

    在正常細胞中,磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細胞膜脂質雙層的內側,而在細胞凋亡早期,細胞膜中的磷脂酰絲氨酸(PS) 由脂膜內側翻向外側。Annexin V是一種分子量為35~36kD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白,與磷脂酰絲氨酸有高度親和力,故可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。因此Annexin V被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。將Annexin V進行熒光素(EGFP、FITC)標記,以標記了的Annexin V作為熒光探針,利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發生。實驗步驟:  1. 搜集細胞  2. 加入5μLAnnexin V-FITC,輕輕混  3. 室溫避光孵育  4. 離心,加Annexin V-FITC重懸細胞  5. 加染色液,室溫避光保存  6. 流式細胞儀檢                  結果示意圖:  服務周期:服務內容說明價格∕元實驗周期流式凋亡建議3重復詢價3個工作日   溫馨提醒:    至少提供108個細胞 
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