bioassay試劑盒故障排查

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新聞動態

2022-03-09

一般建議

1、妥善保存試劑

仔細閱讀數據表并將試劑存放在適當的位置。一些套件需要在不同溫度下儲存不同的組件。

2、平衡試劑以測定溫度

使用培養箱或水浴將所有試劑（酶除外）平衡至測定溫度。酶應解凍并保存在冰上或在測定期間保持在 4°C。

3、運行測試標準曲線

確保試劑沒有任何問題，并確保您仔細按照說明進行操作。除非數據表中另有說明，否則您的標準曲線應該是線性的，并生成與示例圖相似的結果。

4、初步樣品系列稀釋

如果這是您第一次運行特定類型的樣品，請使用微量離心管對您的樣品進行 2 倍系列稀釋。使用原始樣品和稀釋樣品運行測定，以確定是否需要稀釋以及＊佳稀釋因子。在所有后續實驗中使用選擇的稀釋因子。

5、小心移液

孔之間的一致性非常重要；小心地從孔的一側移液，確保所有孔的體積相同，所有試劑都流到底部。特別注意避免氣泡，這會破壞吸光度讀數。

特殊情況：

?檢測不工作（無信號）

可能的原因	解決方案
檢測緩沖液太冷，導致酶活性低	將試劑平衡至室溫或指定的測定溫度。
在方案中省略試劑或步驟	重新閱讀數據表并仔細按照說明進行操作。
讀板波長不正確	重新閱讀數據表并仔細按照說明進行操作。
使用不正確的微孔板	吸光度：透明板；熒光：黑色板（底部可以是透明或黑色）；發光：白板。

?帶有特殊信號的樣本

可能的原因	解決方案
不兼容的樣品類型	重新閱讀數據表以獲取兼容樣品列表。
樣品制備不當	對于酶活性測定，不要對樣品進行脫蛋白。脫蛋白會殺死所有酶活性。如果您確實需要去蛋白，請確保您已正確中和您的樣品。EDTA 是一種金屬螯合劑，會干擾我們的一些檢測。任何測量金屬離子或需要金屬輔因子的測定都與 EDTA 不相容。

?信號太高

?信號太低

可能的原因	解決方案
試劑儲存不正確	檢查試劑是否已正確存放。如果儲存不當，它們可能會迅速降解。
試劑已過期	檢查套件的保質期。
樣品太稀	用更多的細胞/組織濃縮或重新制作您的樣品。

?信號上下跳躍

可能的原因	解決方案
未混合和不均勻的孔	快速敲擊盤子數次以徹底混合內容物。
well中的氣泡	檢查孔中是否有氣泡。重復測定和移液器小心避免氣泡。
沉淀在well中	仔細檢查沉淀物或混濁度。確定沉淀的原因并稀釋、脫蛋白或使用其他替代樣品處理來消除沉淀。

?標準曲線不是線性的

可能的原因	解決方案
移液錯誤和可變性	重新制作標準稀釋液，并在小心移液時嚴格按照說明進行操作。
計算錯誤	重新檢查計算。一些化驗有不同的方程式。
標準曲線可能是非線性擬合	有關擬合方程和示例圖，請參閱數據表。